موسسه اطلاعات مرغداری - طراحي روش ايمونوفلئورسنت اختصاصي جهت تفكيك سويه هاي حاد از واكسن ويروس نيوكاسل

طراحي روش ايمونوفلئورسنت اختصاصي جهت تفكيك سويه هاي حاد از واكسن ويروس نيوكاسل

دكتر فرهيد همت زاده ، دكتر غلامرضا نيكبخت بروجني ، دكتر سيد فرشاد كاتب ، دكتر فرشته مختاري ، دكتر آرزو علي نژاد ، محمدمهدي غفاري

هدف: تهيه پادتن اختصاصي كنژوگه با فلئورسيين ايزوتيوسيانات جهت تفكيك سويه هاي حاد ويروس نيوكاسل از سويه هاي واكسن زنده.
طرح: مطالعه تجربي.
حيوانات: 28 راس خرگوش.
روش: پس از تكثير 4 سويه حاد و دو سويه واكسينال B1 و لاسوتا در تخم مرغ جنين دار اقدام به خالص سازي نمونه ها به روش اولتراسانتريفيوژ گرديد. ويروس هاي خالص شده جهت تهيه آنتي سرم فوق ايمن، به تفكيك به 7 گروه 4 تايي خرگوش تزريق شده و در نهايت حضور پادتن هاي هر گروه توسط روش ژل ديفوزيون مشخص گرديدند. سپس پادتن هاي ضد گروه B1 و لاسوتا و مخلوط اين دو توسط سويه هاي حاد و پادتن هاي سويه هاي حاد يك بار با سويه، B1 يك بار با سويه لاسوتا و يك بار با مخلوط B1 و لاسوتا جذب شده و مجددا به روش AGID مورد آزمايش قرار گرفتند. جذب و خالص سازي تا جايي ادامه يافت تا تنها يك خط رسوبي در هر گروه و فقط بر عليه سويه مربوطه حاصل آيد. پادتن هاي حاصله با فلئورسين ايزوتيوسيانات كنژوگه شده و روي 28 نمونه ويروس نيوكاسل مختلف 2 نمونه سوش زنده واكسن و 14 نمونه منفي آزمايش شده و رقت مناسب آنتي سرم كنژوگه مشخص گرديد.
نتايج: پادتن هاي اختصاصي ضد سوش هاي حاد جذب شده با مخلوط سوش هاي B1 و لاسوتا به عنوان پادتن اختصاصي ضد سوش حاد و پادتن هاي ضد B1 و ضد لاسوتاي جذب شده با سوش هاي حاد به عنوان پادتن اختصاصي ضد سويه هاي واكسن به دست آمد. پادتن ضد سويه هاي حاد در صد در صد موارد با سويه هاي حاد واكنش نشان داده و در هيچ مورد با سويه هاي واكسن تكثير شده در مايع الانتوييك جنين تخم مرغ واكنش نشان نداد.
نتيجه گيري: پادن هاي حاصله به خوبي قدرت تفكيك سويه هاي حاد از واكسن زنده را داشته و در مدت زمان بسيار كمتري از روش هاي معمول قدرت شناسايي سويه هاي حاد بيماري زا را دارند.

کليدواژگان: ويروس بيماري نيوكاسل ، پادتن اختصاصي ، ايمونوفلئورسنت ، ژل ديفوزيون ، واكسن B1 ، واكسن لاسوتا