|
يکشنبه ۱۶ خرداد ۱۳۹۵ ساعت ۱۷:۲۴
کد مطلب : 10749
همسانه سازي ژن فيوژن پروتئين ويروس بيماري نيوكاسل در شاتل وكتور بكميدي مشتق از باكيولوويروس به منظور بيان در لاين سلولي حشره
|
محمد صادق هاشم زاده، محمد رضا شفاعتي*، روح الله درستكار
|
زمينه و هدف: ويروس بيماري نيوكاسل (New Castle disease Virus) از مهم ترين عوامل بيماري زا در طيور است و واكسيناسيون هم چنان به عنوان راهكاري موثر براي كنترل اين بيماري مطرح است. فيوژن پروتئين (F) قرار گرفته روي سطح ويروس بيماري نيوكاسل، در بيماري زايي اين ويروس نقش اساسي دارد و مي تواند به تنهايي باعث القاء ايمني محافظتي گردد. با اين پيش زمينه، هدف ما، توليد يك سازه نوتركيب (كد كننده پروتئين F) از شاتل وكتور بكميدي مشتق از باكيولوويروس به منظور بيان آن در لاين سلولي حشره بود.
مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي، ابتدا ژن كامل F از سويه غير بيماري زاي لاسوتا ويروس بيماري نيوكاسل، به منظور توليد رشته DNA مكمل (cDNA)، با تكنيك RT-PCR فراوان سازي گرديد. محصول تكثير، در وكتور كلونينگ A/T و سپس در پلاسميد دهنده pFastBac Dual همسانه سازي گرديد. بعد از تاييد فرآيند كلونينگ با دو روش PCR و آناليز هضم آنزيمي، صحت توالي با روش تعيين توالي تاييد شد. در نهايت بكميد نوتركيب واجد ژن F متعاقباً در سويه باكتريايي Bac10DH توليد و سازه فوق با يك پنل اختصاصي PCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ژن F و پرايمرهاي عمومي 13M مورد تاييد قرار گرفت.
يافته ها: تحليل تست هاي تاييدي نشان داد كه سازه نوتركيب بكميدي- بيان كننده ژن پروتئين F با توالي و چارچوب صحيح- با موفقيت ساخته شده است.
نتيجه گيري: محصول اين سازه نوتركيب واجد ژن F علاوه بر كاربرد مستقل در القاء ايمني محافظتي مي تواند به همراه محصول ديگر باكيولوويروس هاي نوتركيب- بيان كننده ژن هاي HN و NP براي توليد ذره شبه ويروسي (virus-Like particle،VLP) ويروس فوق در لاين سلولي حشره- مورد استفاده قرار گيرد.
کليدواژگان:
باكيولوويروس، فيوژن پروتئين، ويروس بيماري نيوكاسل
