|
شنبه ۲۶ تير ۱۳۹۵ ساعت ۱۱:۵۸
کد مطلب : 10888
ايجاد پلاک توسط سويه V4 ويروس عامل بيماري نيوکاسل بر روي كشت سلولي و بررسي مولكولي با روش واکنش زنجيره پليمراز نسخه برداري معکوس (RT-PCR)
|
سبحاني ساناز, مهربان پور محمدجواد
|
امروزه در بسياري از کشورهاي دنيا واکسن کلون شده مورد استفاده قرار مي گيرد. جهت کلون کردن يک ويروس، يکي از راه ها رشد ويروس بر روي کشت سلول و جدا کردن پلاك هاي مجزا و متفاوت و بررسي آنها از لحاظ مورفولوژي و ژنتيکي است.
در اين تحقيق، ابتدا سلول هاي (MDCK) Madin-Darby Canine Kidney بصورت تک لايه و بطور استاندارد کشت داده شد. رقت هاي مختلف ويروس به سلول هاي تک لايه MDCK همراه با تريپسين، آگار و سولفات منبزيوم اضافه شد. ويروس توانست بر روي سلول هاي فوق تکثير و ايجاد اثر سايتوپاتيک (CPE) و پلاک نمايد. در رقت 6-10 تعداد 6 پلاک که از لحاظ شکل و اندازه تفاوت داشتند برداشته شدند و جهت تکثير به تخم مرغ جنين دار 11-9 روزه تلقيح گرديد. بعد از 48 ساعت مايع آلانتوئيک هر تخم مرغ حاوي پلاک برداشت ونسبت به جداسازي RNA هر پلاک اقدام گرديد. منطقه شکست (Cleavage site) پروتئين ادغامي (Fusion) با تست RT-PCR انجام شد و محصول PCR خالص سازي وسکانس گرديد. سکانس نوکلئوتيدها و آمينواسيدها براي هر پلاک با سوش هاي ثبت شده در بانک ژني مقايسه شد. سکانس نوکلئوتيدهاي تمامي پلاك هاي بدست آمده، 97 تا 99% همخواني با ويروس V4 در بانک ژني را تاييد نمود. هدف از اين پژوهش ايجاد پلاک از سوش V4 ويروس نيوکاسل بر روي سلول هاي MDCK جهت ايجاد پلاك هاي مجزا و در نهايت بررسي مولکولي پلاك هاي ايجاد شده مي باشد.
كليد واژه: ويروس نيوکاسل، واکنش زنجيره پليمراز نسخه برداري معکوس، کشت سلولي
